Flow Cytometry Là Gì

     
Flowcytometry là kỹ thuật có tác dụng đo được những đặc tính huỳnh quang cùng quang họccủa một tế bào đối kháng hoặc những hạt như vi sinh vật, nhân và nhiễm nhan sắc thể được chuẩnbị trong dung dịch lỏng khi bọn chúng đi qua một nguồn sáng. Các máy flow cytometryđầu tiên là 1 thiết bị đơn thông số kỹ thuật (single-parameter) chỉ được áp dụng đểphát hiện kích cỡ của tế bào. Hiện nay nay, các thiết bị với độ phức hợp cao cókhả năng phân phát hiện đôi khi 14 thông số đang được vạc triển. Cách thức cơ bảncủa nghệ thuật này liên quan tới ánh sáng tán xạ và ánh nắng huỳnh quang phát ra,được tạo thành do mối cung cấp sáng kích phù hợp (thường là chùm tia laze). Các thông sốthu được rất có thể là thông tin giá trị về những khía cạnh hóa sinh, sinh lý với phântử của hạt. Ánh sáng tán xạ trong chuyên môn có liên quan trực tiếp tới những đặcđiểm cấu trúc và sắc thái học của tế bào, trong lúc đó, tia nắng huỳnh quangcó nguồn gốc từ các đầu dò lưu lại huỳnh quang, tỉ trọng thuận cùng với lượng đầu dòhuỳnh quang gắn vào tế bào và các thành phần trong tế bào. Tất cả hai một số loại flowcytometry khác nhau là non-sorting (không phân loại) cùng sorting (phân loại).

Bạn đang xem: Flow cytometry là gì

Bạn đã xem: Flow cytometry là gì

FASC (Flourescent activated cell sorters) là những máy đếm tế bào theo chiếc chảycó khả năng phân loại các thế bào được lưu lại huỳnh quang từ 1 hỗn thích hợp cácquần thể tế bào. Đầu tiên, những hạt vẫn được mang lại đèn laze trong mộtdòng chất lỏng. Ngẫu nhiên hạt phối hợp hoặc tế bào nào có form size từ 0.2-150 µmđều phù hợp; các tế bào từ các mô rắn phải được sa thải trước khi phân tích.Khi những hạt trải qua tia laze, bọn chúng tán xạ tia nắng laze, ánh nắng tán xạ cùng ánhsáng huỳnh quang sẽ tiến hành thu trên thấu kính trên vị trí đam mê hợp. Sự phối kết hợp giữabộ phận tách chùm tia và các kính lọc đã hướng ánh nắng tán xạ và tia nắng huỳnhquang cho tới detector; sau cuối các detector sẽ khởi tạo ra biểu hiện điện tỉ lệ thuậnvới bộc lộ quang học. Cácthành phần chính của máy flow cytometer (đếm tế bào theo mẫu chảy) và cellsorter (phân nhiều loại tế bào) gồm những: hệ dung dịch, khối hệ thống quang học (ánh sángkích ưng ý và cỗ thu ánh nắng kích thích), mạng lưới điện (detector) cùng một máytính. Hệ thống dung dịch gồm trách nhiệm điều phối dòng hỗn hợp chứa những hạttới nguồn sáng. Khối hệ thống quang học kích đam mê sẽ triệu tập nguồn sáng sủa tới các tếbào/ các hạt, còn hệ thống quang học tập thu nhận đã chuyển những ánh sáng tán xạ hoặcánh sáng huỳnh quang đãng tới mạng lưới điện tử. Màng lưới điện sẽ phát hiện tín hiệuvà chuyển những tín hiệu thành những thông tin số tỉ trọng thuận với cường độ ánh sángvà máy vi tính sẽ phân tích những thông tin này. Kỹthuật flow cytometry được sử dụng rộng rãi trong các ứng dụng nhằm phát hiệncác chống nguyên màng, tế bào hóa học và nhân. Bên cạnh ra, tổng thể tế bào và những thànhphần tế bào như bào quan, nhân, DNA, RNA, nhiễm sắc đẹp thể, cytokines, hormone vàprotein hoàn toàn có thể được phân phát hiện thông qua kỹ thuật này. Câu hỏi phân tích những quátrình trong tế bào và quy trình tế bào nhờ việc đo lượng calcium cùng điện thếmàng cũng là một trong trong những ứng dụng của flow cytometry. Nội dung bài viết dưới trên đây sẽtrình bày kỹ rộng về các thành phần của một lắp thêm flow cytometry. Hệthống dung dịch có vai trò vận chuyển những tế bào trong một dung dịch trải qua thiếtbị nhằm thu được những dữ liệu, hệ thống này bao gồm 2 thành phần: sheath fluid (dòngdung dịch bảo vệ/ cái dung dịch mặt ngoài) cùng pressurized line (dòng áp suất).Sheath fluid là một trong dung dịch trộn loãng (thông thường xuyên là đệm PBS- phosphate-bufferedsaline), được tiêm vào phòng flow nằm tại trung trung ương của thiết bị bởi vì dòng áp suất.Một áp suất không khí cũng được tiêm vào các tế bào đã làm được hòa chảy trong ống mẫuvào bên trong buồng flow. Cái mẫu sẽ tiến hành đưa vào lõi trung trung ương mà xung quanglà loại dung dịch đảm bảo an toàn và biến hóa dòng lõi (core fluid- một cái rất hẹp chỉđể từng tế bào hoặc từng phân tử đi qua), được tạo ra dựa trên sự khác hoàn toàn áp suấtgiữa dòng dung dịch bên phía ngoài (sheath fluid) và mẫu mẫu (sample fluid), từ bỏ đógiúp tập trung tế bào/hạt gồm trong chủng loại thành chiếc tế bào solo để trải qua chùm tialaze. Vày đó, quá trình này được cho phép chiếu sáng đồng đầy đủ mỗi tế bào phải được gọilà quy trình tập trung thủy đụng lực học (hydrodynamic focusing).

Xem thêm: Cách Tắt Thanh Tìm Kiếm Trên Win 10 Chỉ Với Vài Thao Tác, Please Wait


*

Tỷlệ đưa các tế bào vào chùm tia laze rất có thể được tiến hành nhờ khối hệ thống máy flowcytometer
dựa trên mục tiêu của phân tích. Ví dụ, tỉ lệ loại chảy cao thường xuyên sửdụng đến việc tính toán như immunophenotyping làm việc tế bào động vật hoang dã có vú, trong khiđó, tỉ lệ mẫu chảy thấp hay thích phù hợp với các ứng dụng yêu mong độ phân giảicao như đối chiếu thành phần DNA. Các thông số quan trọng cần thiết thu được nhờsự tiếp xúc các hạt cùng với chùm tia laze phụ thuộc vào chuyển động tối ưu của các hệthống dung dịch. Bởi đó, đề xuất phải bảo vệ rằng không tồn tại bong nhẵn khí và các mảnhvụn trong hệ thống này để áp lực sẽ đồng đều ở phần đa thời gian. Hệthống quang học trong sản phẩm công nghệ flow cytometry làm nhiệm vụ chiếu ánh sáng kích thíchbao tất cả đèn laze, thấu kính và thành phần thu ánh sáng. Thấu kính gồm vai trò địnhhình và triệu tập chùm tia laze. Ánh sáng tia laze được tạo ra ra bằng cách kích thíchcác điện tử (electron) đang ở tâm lý cơ bản lên trạng thái kích thích tất cả mứcnăng lượng cao nhờ điện áp, sau một thời gian ngắn (thường là 10-7 –10-8 giây), những điện tử đã trở về tâm trạng cơ bạn dạng và vạc ra nănglượng dưới dạng các photon ánh sáng. Sau khi laze hấp thụ vào tế bào, hầu hết ánhsáng bị chệch hướng so với mặt đường tryền trực tiếp do chạm chán phải vật cản trở được gọi làánh sáng tán xạ. Tất cả hai loại tia nắng tán xạ là forward scatter (FSC) cùng sidescatter (SSC). Các yếu tố ảnh hưởng tới sự tán xạ tia nắng là màng tế bào,nhân, những hạt của tế bào, bản thiết kế và bề mặt tế bào. Nhìn chung kích thước củatế bào hoặc của một hạt với độ phức tạp bên trong tế bào được sệt hiệu vày loạitán xạ. Ánh sáng FSC là hiệu quả của sự nhiễu xạ thu được dọc theo trục của chùmtia tới laze. FSC tỉ lệ thành phần với diện tích mặt phẳng hoặc kích thước tế bào cùng phù hợpđể phạt hiện, phân biệt những hạt về kích thước, hay sử dụng thịnh hành trongimmuophenotyping. Còn ánh sáng SSC bao hàm hầu hết những ánh sáng sủa khúc xạ với nhiễuxạ, được thu ở góc cạnh 90o đối với chùm tia tới laze. SSC tỉ trọng với thànhphần các hạt hoặc độ phức tạp bên trong tế bào. ở bên cạnh đó, ánh nắng huỳnhquang có bắt đầu từ kháng thể hoặc dye đánh dấu huỳnh quang như là PI cũng đượcphản xạ tại và một góc cùng với SSC.
*

Hình 2: Ánh sáng sủa tán xạ (lightscattering). FSC tỉ lệ thành phần với kích thước, trong những khi đó SSC tỉ trọng với những thành phầnvà độ phức tạp phía bên trong tế bào. Córất nhiều thông số kỹ thuật laze trong đồ vật flow cytometer
dựa vào loại hóa học huỳnh quangđược kích thích. Đèn argon laser (một đèn laze thông thường với cách sóng kíchthích 488 nm) được áp dụng để kích thích những dye tổng hòa hợp như fluoresceinisothiocyanate (FITC) cùng dye huỳnh quang tự nhiên như tảo cùng phytoplankton. Rấtnhiều sản phẩm flow cytometer với sorter có thêm đèn laze có khả năng kích mê say chấthuỳnh quang đãng ở bước sóng kích thích hợp ở dải sóng UV (300-400nm) hoặc red diodekích thích hóa học huỳnh quang ngơi nghỉ dải sóng đỏ (630 nm).

Xem thêm: Hoạt Hình Doraemon Muốn Ăn Thì Lăn Vào Bếp, Doraemon Tập 216

Hệthống thu nhận ánh nắng gồm thấu kính để thu ánh sáng phát ra tự sự tương tácgiữa chùm tia laze với hạt; một hệ thống gương cùng kính thanh lọc để tách và sau đó hướngánh sáng bao gồm bước sóng quánh hiệu đến detector mê thích hợp.